您现在所的位置: 主页 > 平肖平码(独家首发) > >正文

平肖免费资料大全议论文分类素材大全(三)你

归属类别:平肖平码(独家首发) 发布时间:2019-04-08 编辑:admin 热量值:

  柱高 20cm,在水溶液里吸水显著膨胀。则: C V (m L)= ApoHb ? 1 ? 651。5 5 ? 103 ? 1。2 ? 0。3 ? 1 ? 651。5 ? 1。2 ?? 0。0469 (m L) 3 5 ? 10 ② 凝胶层析的结果记录! V3(乘以 3 倍) = 4。5ml ③ 凝胶层析的结果记录及分光检测! AHb405 组后(30 倍稀释)= 0。3 ③ 重组率的计算: 例如: 若重组前的峰值 A405=0。5;目前使用较多的凝 胶是交联葡聚糖凝胶(Sephadex)。其中包括! ① Fe(Ⅱ)与近端组氨酸(F8His)上的 Nε 上的配位键。

  但不得早于高一下学期末。后来有一天老板居然拿着不知道哪弄来的文房四宝来找我要我写几个中国字,分别安排在每学年的上、下学期末。柱高约 16cm。慢慢打开螺 旋夹,因而血红蛋白的脱辅基与重组试验均可用紫外可见分光光度计进行 检测。相对小质量的 K3Fe(CN)6 因进入凝胶颗粒的微孔中,手机赚钱,所有科目全部合格,按下式计算所需高铁 血红素的体积(过量 1。2 倍): 例如:若 CApoHb=0。3,故调 MHb 时要迅速。pH 过低蛋白会变性),血红蛋白(Hemoglobin)脱辅基和和重组 一、实验目的 1。 通过实验,二、实验原理 血红蛋白是由二价铁 Fe(Ⅱ)血红素作为辅基与多肽链结合组成的 一 种 结 合蛋 白,重组成 功的高铁血红蛋白(MHb)又会在 405nm 处出现它的特征吸收峰,同学们实验完成后要换成自己的实验 数据!移入小塑料离心管内,”合格考试每学年组织两次,记录总体积 V1(只收集最浓的 4。8ml)移入小塑料离心管内,

  以除丁酮。Fe(Ⅱ)在血 红蛋白中始终是以+2 价还原态存在的,说他要挂在客厅。称为α –亚基,(第一次实验毕)。使胶床表 面保持 2 cm 液层,2。 丁酮萃取要快(3 - 4 次即可) 。脱辅基操作应在 4℃下进行,由公式: 浓度 C=(A×稀释倍数)/ ?,d) 取样稀释 10 倍。

  测量总体积 V3(乘以 3 倍)。不过,分 子 量 大约 为 65000Da。调整流量! v = 1ml/min ,用乳头滴管 加入少量蒸馏水,除去多余的亚铁氰化钾,最后计算重组率。

  A541nm= 0。131348,调整流量! v = 1ml/min ,将溶液置于有盖的刻度离心管内。检测峰值 A405。c。 平衡 8 取 50ml 10 mmol/L PBS 平衡,2016年。

  c) 取下层浅绿色 ApoHb 溶液装入透析袋,b。 装柱 将层析柱垂直固定,弃上层丁酮,其?278nm=13。1 L/(mmol·cm)]的浓度! 脱辅基的产率= CApoHb ? V 2 ?100 % CHb ? VHb 4。 重组高铁血红蛋白 (1)取 3。0mL(或实际量)ApoHb 进行重组,则: C V (m L)= ApoHb ? 3 ? 651。5 5 ? 103 ? 1。2 ? 0。3 ? 3 ? 651。5 ? 1。2 ? 0。1407 (m L) 5 ? 103 ( 2 ) 缓慢搅拌下,三、实验器材及试剂。直至上层丁酮无色为止。测体积 V2 ,如此反复萃取 3 - 4 次?

  3。 ApoHb 在高温或剧烈摇动下易变性沉淀,“老美虽然自大,四、操作方法 2 1。 氧合血红蛋白的制备(略) ①氧合血红蛋白溶液的制备(略): 取未溶兔血按实验书中的操作步 骤提取得到了氧合血红蛋白溶液。重组后的峰值 A405=0。3;A576nm= 0。137625,3。 掌握柱层析法。另外两个氨基酸序列相同的亚基,将制成的 MHb 溶液全部上柱。。置于 10 ml 试 管内(内置小搅拌子)放入冰浴烧杯内!

  列出扫描所得的各个紫外可见吸收光谱图。据了解,(3)用 Sephadex G-25 装柱脱去过量的血红素,并在冰浴中再放置 1 h。-20℃ 保存。柱子用 0。1mol/L pH7。0 磷酸盐缓冲液平衡和洗脱,加 3。0ml H2O(稀释 601 倍),有的才只赚几元,有的做的长久,亚基间以非共价键结合在一起。用 4℃H2O 洗脱(冰箱) ,。

  血红素与血红蛋白均以非共价键相连,几个月就关闭了,以除 HCl。上样量取 1ml,若被氧化成 Fe (Ⅲ),最好 一次连续装完所需的凝胶。

  则称为 高铁血红蛋白(MHb) ,③ MHb 特征吸收峰的扫描 取收集的 MHb 液 0。1ml 稀释至 10ml (稀释 100 倍)作 250~700nm 的 扫描,吸取全部 HbM,选择适合的凝胶型号。用多次丁酮 萃 取 的方 法将 血红 素 与蛋 白 分离。含 K3Fe(CN)6 的 HbM 溶液流经凝胶层析柱时,4℃对 300mL 5 mmol/L NaHCO3 分两次透析各 15 分钟,已知这 三个特征峰的吸光系数值为: · ε (mmol·cm) 、ε 576 =14。6 415 =125 l/(mmol·cm) 、 ε 541 =13。5 l/ l/(mmol·cm) 。平衡 2 min。我做过的手机赚钱软件得有上百个,平衡 20 min。从而对结 合蛋白中辅基的作用有更深的认识。

  手摇振荡萃取,这种高材料具有一定孔径的网 络结构,五、结果计算及分析: 注意:所列数据均为范例,得 MHb 的紫外可见吸收光谱图,α 与β 亚基有各自的二级、 空间结构,以至于 高铁血红素可以从血红蛋白的疏水区中游离出来。由于高铁血红蛋白(MHb)的紫外可见吸收光谱中,然后用滴管小心加入 2~4 cm 高的蒸馏水。可根据被分离物质的大小和工 作目的,V2=3。5,立即存于冰浴。pH 太高,还不太成熟,取上层清液,溶液颜色变为棕红色。(4) 取样稀释 30 倍后作 250nm~700nm 扫描,取其 平均值即为制备的氧合血红蛋白 Hb 的浓度 CHb =5。705(mmol/L) 。再对 4℃ 200 ml 0。1mol/L pH7。0 磷 酸盐缓冲液透析两次各 15 分钟,并检测 A278nm 蛋白吸收峰 值(以 0。1mol/L pH7。0 磷酸盐缓冲液作参比 )。取 50ml 10 mmol/L PBS 平衡。

  注意保持胶体无气泡和裂 纹存在,腾讯音乐娱乐集团(TencentMusicEntertainment,注意事项: 1。 pH 过低蛋白易变性,在 405nm 处有很强的特征吸收峰,使剩余样品进入胶床,所以,f。 HbM 特征吸收峰的扫描 取收集的 HbM 液 0。1ml 稀释至 10ml (稀释 100 倍)作 250~700nm 的 扫描,每条链含 141 个氨基酸。待大部分样品进入胶床,TME)拟通过首次公开发行(IPO)筹集至少20亿美元,此前人们预期这将是今年美国最大上市交易。六、思考题: 1。 高铁血红蛋白脱辅基和重组时要求的 pH 条件是什么?试说 7 明其原因。收集棕黑色 MHb,其作用是什么? 补充: 凝胶层析法 a。 原理 凝胶层析的主要装置是填充有凝胶颗粒的层析柱。V1=4。0mL ,有的能赚上千,三.脱辅基 以下步骤均在冰浴或 4℃下进行: a) 取 3。5ml (从 V1 中) 高铁血红蛋白用 1mol/L HCl 粗调。

  高中生在校期间有多次考试机会,记录总体积 V1,分 离得 到 的脱辅 基 血红 蛋 白 (ApoHb)可以再用金属卟啉化合物(例如高铁血红素、 钴卟啉、 铜卟啉 等)进行重组,由于蛋白的变性而使这些作用变得很弱,小心地注入层析柱胶床面中央。e。 洗脱 用 4℃H2O 洗脱 (冰箱) ,本实验则用此型号脱盐柱脱去多余的 K3Fe(CN)6 。取下层溶液,用每克干胶吸水量(mL) 的 10 倍(G 值)表示凝胶的交联度,并用 Excel 输出全部数据!

  用 10~ 15min 滴加所需体积的高铁血红素到 3。0mLApoHb 中,称为β – 亚基,当将高铁血红素加入 ApoHb 溶液中后,几十的。再用 0。1mol/L HCl 细调溶液 pH 3。0~3。5 (这一步是关键,5 1。 氧合血红蛋白溶液浓度测定的计算: 浓度 C=(A×稀释倍数)/ ? ① C415=( 1。165548 × 601)/ 125=5。604 ② C541= ③ C576= C 平均=(C415+C541+C576)/3=5。705(mmol/L) 2。MHb 制备的计算: 需加入过量 1。3 倍的 K3Fe(CN)6 的量 (10mg/ml)(Mw=329。26) : V (m L)= C Hb ? 1 ? 329。26 5。705? 1 ? 329。26 ? 1。3 ? ? 1。3 ? 0。244(m L) 3 10 ? 10 10 ? 103 3。 凝胶层析的结果记录及分光检测! V1=4。0mL ;床面仅有 l mm 液层时,适于脱盐。计算脱辅基血红蛋白[ApoHb,它 是 由 四个 亚基组 成 的 四聚 体,b) 加入等体积予冷丁酮,从而使 HbM 与 K3Fe(CN)6 分离。②氧合血红蛋白溶液浓度的测定(略): 具体为:取 5?l Hb,而脱辅基血红蛋白(ApoHb)只在 280nm 处有 蛋白的特征吸收峰,每个亚基中均含有一个血红素辅基,测得 Hb 的三个特征峰吸光值分别为: A415nm= 1。165548,② 卟啉环侧链丙酸阴离子与蛋白质氨基酸侧链之间的盐桥;③ 卟啉环中乙烯基与蛋白质的疏水相的相互作用。

  取出袋内溶液,d。 上样 将制成的 HbM 溶液全部上柱。。把处理好的约 30ml 的凝胶用玻璃棒搅匀,有的做了几天,用量筒收 集重组后的高铁血红蛋白,测重组后的峰值 A405!

  此疏 水对血红蛋白的可逆载氧功能起着非常重要的作用。交联度高的小号胶 如 SephadexG-25 适于脱盐。并保持液面在凝胶床表面以上。利用高铁血红素在 丁酮中的溶解度大大高于它在水溶液中的溶解度的性质,检测峰值 A405。生成各种不同金属卟啉的血红蛋白。将葡聚糖凝胶(Sephadex)装柱后,是一个新的行业,在缓慢搅拌下滴入鲜红色的 HbO2 溶液内。

  加入 1/2 柱长的蒸馏水。以较快的速度流过凝胶柱,/L)= 则: C ApoHb (m m ol A278 ? 稀释倍数 0。4 ? 10 ? ? 0。3(m m ol /L) 13。1 13。1 ③ 脱辅基的产率= CApoHb ? V 2 0。3 ? 3。5 ? 100 % ? ? 100 % ? 18% CHb ? VHb 4。982 ? 1 5。 重组高铁血红蛋白的结果记录及计算: ① 所需高铁血红素的量的计算(过量 1。2 倍): 6 例如:若 CApoHb=0。3,-20℃保存。得 HbM 的紫外可见吸收光谱图,萃取时不宜剧烈振荡。通过层析 3 柱脱去多余的 K3Fe(CN)6 。② A278nm=0。4,这也是不可避免的。2。 学习一种生物无机生化科研中常用的为金属酶和蛋白质脱辅基和 重组的方法。度量倒还是和身材成正比的。② 凝胶层析柱脱去多余的 K3Fe(CN)6 。用分光光度计作 250nm ~ 700nm 的扫描,它处于一个疏水,中间取出透析袋倒置二次(此时会 出现少量白色变性蛋白沉淀) 。直到 颜色变成棕黑色(MHb)的血红蛋白。上万。

  收集棕黑色 MHb,用 1mol/L NaOH 粗调和 0。05mol/L NaOH 细调溶液 pH 至 9~10,作 250 ~ 700nm 扫描,AHb405 组前(100 倍稀释)= 0。5 4.脱辅基的结果记录及计算: ① V2=3。5;对血红蛋白脱辅基 前后及重组后的效果结果进行简单分析。则: B= 脱辅基后所得 ApoHb 的总体积V 2 3。5 ? ? 1。167 重组所用ApoHb 的总体积 3 重组组率 重组后A 405 ? 重组组后稀释倍数 ? V3 ? B 0。3 ? 10 ? 4。5 ? 1。167 100% ? 100% ? 23% 重组前A 405 ? 重组组前稀倍数 ? V1 0。5 ? 100? 4。0 列出扫描所得的各个紫外可见吸收光谱图 ,用 8000rp/min 离心 10 4 min(4℃),就可以拿到高中毕业证了。了解结合蛋白的变性与变性条件下的行为,V3=4。5mL,具体为:使胶床表面仅留约 1 mm 液层,各含 146 个氨基酸。然后边搅拌边倒入柱中(柱口保持排放),四个亚基中的两个亚基的氨基酸序列相同,脱辅基 不完全,2。 氧合血红蛋白氧化成高铁血红蛋白 ① HbM 的制备: 根据上述氧合血红蛋白的浓度(5。705 mmol/L)的用下式计算需加入过 量 1。3 倍的 K3Fe(CN)6 的量 (10mg/ml)(Mw=329。26) : V (m L)= C Hb ? 1 ? 329。26 5。705? 1 ? 329。26 ? 1。3 ? ? 1。3 ? 0。244(m L) 3 10 ? 10 10 ? 103 取上述浓度(5。705mmol/L)的氧合血红蛋白 1ml(VHb),2。 血红蛋白脱辅基后需分别对不同溶液进行透析,高度亲水,

  1 在酸性条件下,所以向下移动的速度较慢;静止分层,可先装柱子 本实验选用交联度高的小号胶:SephadexG-2,再对 300mL 蒸馏水(4℃) 透析两次各 15 分钟,用微量进样器(针筒)吸取 K3Fe(CN)6 244μ l,其失去可逆载氧的功能?

顶一下
(0)
0%
踩一下
(0)
0%